作者：唐哲，文爱东，吴寅，赵磊，李宏力，石茹

【关键词】 卡马西平

　　Determination of carbamazepine concentration in human saliva by HPLC and its pharmacokinetic study

　　【Abstract】 AIM: To determine carbamazepine(CBZ) concentration in human saliva by HPLC and study its pharmacokinetics. METHODS: Shimpack CLCODS C18 (150 mm×6 mm, 5 μm) spectrum analytical column was used and methanolwater(53∶47)was adopted as the mobile phase. Flow rate was 1.0 mL・min-1, detection wavelength was 212 nm, column temperature was 23℃ and the dosage of CBZ was 50 μL. The pharmacokinetic parameters of CBZ tablets taken by 6 healthy volunteers at a single oral dose of 200 mg were calculated according to CBZ concentration in saliva. RESULTS: The standard curve was linear (r=0.999) within the range of 0.40~4.32 mg・L-1 for CBZ. The limit of detection in saliva was 30 μg・L-1 (S/N≥3). The average recovery was 99.17%-104.80%；the interday RSD and intraday RSD was 2.6%-4.9% and 3.0%-8.6% respectively.The results showed that the pharmacokinetics of CBZ was in accordance with the onecompartment open model. Tmax, Cmax, ke, T1/2 and AUC(0~inf) was (4.50±3.15) h, (1.52±0.22) mg・L-1, (0.0090±0.0006) h-1, (77.16±5.26) h and (132.18±8.82) mg ・h・L-1 respectively. After single dosing, the concentrationtime curve of CBZ in saliva presented multiple peaks. CONCLUSION: This method is simple, quick and specific, and can be used to determine CBZ concentration in human saliva and to study its pharmacokinetics.

　　【Keywords】 chromatography, high pressure liquid; carbamazepine; saliva; pharmacokinetics

　　【摘要】 目的： 利用HPLC法测定人唾液中卡马西平浓度，并观察其药代动力学特征. 方法： 采用Shimpack CLCODS C18色谱分析柱 (150 mm×6 mm, 5 μm)，以甲醇水（53∶47）为流动相，流速为1.0 mL・min-1,检测波长为212 nm,柱温为室温,进样量50 μL. 根据唾液药物浓度求算6名健康受试者单剂量口服卡马西平片剂的药代动力学参数. 结果： 本测定方法线形范围为0.40~4.32 mg・L-1，相关系数r=0.999，最低检出浓度为30 μg・L-1 (按S/N≥3计)，方法平均回收率为99.17%-104.80%；日内RSD、日间RSD分别在2.6%-4.9%和3.0%-8.6%. 药动学参数表明，卡马西平人体内过程符合单室开放模型，Tmax, Cmax, ke, T1/2, AUC(0~inf) 分别为（4.50±3.15）h, (1.52±0.22) mg・L-1, (0.0090±0.0006) h-1, (77.16±5.26) h, (132.18±8.82) mg・h・L-1. 单次给药后，CBZ唾液浓度时间曲线出现多峰现象. 结论： 该法简便、快速、专一性强，适用于卡马西平唾液药物浓度测定及药代动力学研究之用.

　　【关键词】 色谱法，高压液相；卡马西平；唾液；药代动力学

　　0引言

　　卡马西平（carbamazepine， CBZ）是临床上常用的抗癫痫药. 由于此药的药代动力学个体差异大，吸收不规则，血药浓度治疗窗窄（4~12 mg・L-1）,容易引起毒副反应［1］. 为保证药品质量及临床疗效，把好临床合理用药关［2-4］，有必要对其进行血药浓度监测和个体化用药. 但血样采集常增加患者痛苦，且操作较繁琐［5］，尤其对于婴幼儿更为不便. 而唾液取样具有无创伤、经济简便、易于接受等优点. 为探讨用无创伤性生物制品取代血样的新途径，通过监测唾液中药物浓度,实现个体化用药,并在社区、家庭推广，取代传统的患者到医院门诊抽取血样的不方便模式，我们利用HPLC法测定卡马西平唾液浓度，并通过药代动力学研究，考察其适用性［6］.

　　1材料和方法

　　1.1材料① 对象健康受试者6（男3，女3）名，年龄20~25岁，平均（22.2±1.8）岁；体质量42~65 kg，平均（53.7±8.9） kg. 肝肾功能正常，受试前1 wk及受试期间未接受其他药物. 每位受试者均自愿参加实验，详细了解实验过程并签署知情同意书. ② 仪器LC10AVP高效液相色谱系统（Shimadzu，Japan）：含两台LC10ATvp型泵，7725型进样阀（配100 μL定量环），CTO10Asvp柱箱，Classvp 5.032色谱工作站(Shimadzu，Japan)，Shimpack CLCODS C18不锈钢分析色谱柱（150 mm×6 mm，5 μm），3D紫外检测器；涡旋混合器（XW80型，上海第一医学院仪器厂）；高速离心机（ABBOTT，USA）. ③ 药品与试剂卡马西平片：上海复旦复华药业有限公司生产，批号20030123卡马西平标准品：中国药品生物制品检定所提供；甲醇为色谱级,其他试剂均为分析纯.

　　1.2色谱条件色谱柱：Shimpack CLCODS C18柱（150 mm×6 mm，5 μm）；流动相：甲醇水(53∶47)；流速1 mL・min-1；检测波长212 nm；柱温为室温；进样量100 μL.

　　1.3方法

　　1.3.1CBZ标准液的制备精密称取4.0 mg的CBZ标准品，置于50 mL量瓶中，用甲醇定容，即得浓度为0.08 g・L-1的CBZ标准液.

　　1.3.2标准曲线制备取正常人混合空白唾液1 mL 5份，分别加入CBZ标准液5，12，24，38和54 μL，配成浓度分别为0.40，0.96，1.92，3.04和4.32 mg・L-1的系列标准样品. 取待测样品150 μL，加入蛋白沉淀剂150 μL，振荡混匀后高速离心5 min（4500 g）,取上清液100 μL进样. 以峰面积为纵坐标（A），CBZ浓度为横坐标（C），进行线形回归，得回归方程：C=0.000003247A-0.1738(r=0.999， n=6)，唾液中CBZ浓度在0.4~4.3 mg・L-1范围内线形关系良好. CBZ的最低检测浓度为30 μg・L-1（S/N≥3）.

　　1.3.3方法专属性将空白唾液、CBZ标准溶液及供试样品分别进样，其三维图谱分别见Fig 1. 在本色谱条件下，CBZ的保留时间为7.2 min，唾液中蛋白质等干扰物质与CBZ可达基线完全分离，确保分析方法的专一性.

　　1.3.4方法回收率和精密度按“标准曲线制备”项下操作，对已知含CBZ 0.40，1.92，4.32 mg ・L-1低、中、高3种浓度的唾液供试品，于同日内连续测定5次，计算其日内精密度；对上述3种浓度样品于5 d内分别进行测定，计算日间精密度；同时计算方法回收率(Tab 1).

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