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CD133抗原在白血病及MDS骨髓细胞中的表达(1) |
| http://www.lunwenda.com 论文下载网 2008-04-16 浏览： 次 【打印论文】【收藏论文】 |
作者：王伟，汪洪毅，赵会霞，崔中光，李广伦
【摘要】 为了探讨CD133抗原与白血病和骨髓增生异常综合症（MDS）发病的关系， 采用免疫细胞化学方法检测CD133抗原在白血病和MDS中的表达。结果显示， 43例急性白血病患者CD133表达的阳性率为51.2％, 急性髓系白血病（AML）组（16/29，55.2%）CD133的表达与对照组（2/15，13.3%）间的差别有统计学意义（P<0.05），慢性髓系白血病（CML）的CD133表达阳性率（2/6）与对照组间的差别无统计学意义（P>0.05）。9例MDS患者中有5例呈CD133表达阳性，阳性率为55.6％, 与对照组相比无显著差异（P>0.05）。在所有白血病患者中CD34 患者的CD133表达率高于CD34-患者，且差异有统计学意义（P<0.05）。CD133表达与性别、年龄、骨髓白血病细胞比例、外周血原幼细胞比例、外周血白细胞数、血红蛋白、血小板数及乳酸脱氢酶水平无显著相关性。结论： AML患者骨髓细胞CD133表达高于正常对照，CD133表达与CD34表达有相关性。CD133高表达可能是急性白血病不良预后的一个因素。
【关键词】 白血病； MDS； CD133； CD34； 预后
Expression of CD133 in Bone Marrow Cells of Patients with Leukemia and Myelodysplastic Syndrome
Abstract To explore the relationship between the expression of CD133 and pathogenesis of leukemia and MDS, immunocytochemistry method was used to examine the expression of CD133 in bone marrow cells of patients with leukemia and MDS. The results showed that the positive rate of CD133 in 41 acute leukemia patients was 51.2%. The expression of CD133 in AML patients (16/29,55.2%) was significantly higher than that in control group (2/15,13.3%). There was no significant difference in CD133 expression between CML and control group.The positive rate of CD133 in 9 patients with MDS was 55.56%(5/9). There was no significant difference between MDS and normal control. The expression of CD133 in all leukemia cells with CD34 was higher than that in leukemia cells with CD34-, and there was significant difference in expression of CD133 between them (P<0.05). The expression of CD133 had no relationship with the clinical prognostic factors such as sex, age, the percentage of leukemic cells in peripheral blood and in bone marrow, WBC counts, hemoglobin concentration, platelet counts and LDH level. It is concluded that the expression of CD133 in bone marrow cells of patients with AML is higher than that in control group. The expression of CD133 is significantly correlated with the expression of CD34. The high expression of CD133 may be an adverse prognostic factor in acute leukemia.
Key words leukemia; MDS; CD133; CD34; prognosis
J Exp Hematol 2007; 15(3):470-473
CD133曾被认为仅仅是一种造血干／祖细胞表面标记。1997年Yin等［1］首次报道了AC133抗原并成功制备了能识别该抗原的单克隆IgG抗体，2000年6月第七届人类白细胞分化抗原工作组会议(ILDAW)将此抗原命名为CD133［2］。文献报道，CD133 CD34 的造血干/祖细胞较之CD133-CD34 造血干/祖细胞有更强的多系分化潜能［3］,从而为白血病的造血干细胞移植提供新的策略。本研究通过免疫细胞化学方法分析CD133抗原在白血病和骨髓增生异常综合症中的表达及其与CD34的协同表达以了解其临床意义。
材料和方法
标本采集与处理
急性白血病（AL）患者43例，其中初治患者36例（2例为MDS转化的AL），治疗后复发患者7例;AML 29例，ALL 14例。AL中男22例，女21例，年龄12-80岁。慢性白血病患者9例，其中男8例，女1例，年龄34-82岁。骨髓增生异常综合症（MDS）患者9例，其中男6例，女3例，年龄15-76岁。以上患者均为2004年3月20日-8月10日在我院血液病研究室确诊的病人。另取非血液系统恶性疾病患者15例作为对照，对照组与病例组在性别、年龄上无显著差异。
中国实验血液学杂志 J Exp Hematol 2007; 15(3)CD133抗原在白血病及MDS骨髓细胞中的表达取以上患者骨髓2 ml，常规肝素抗凝，淋巴细胞分离液分离出单个核细胞（MNC）， 895×g离心20分钟。离心后液体分3层，上层为血浆，中层为分层液，下层为红细胞，在上层与中层交界面呈现浑浊带，此层含有大量单个核细胞。用毛细吸管轻插至白膜层，沿管壁周缘吸出界面层细胞，移入另一无菌刻度离心管中。用5倍以上体积的PBS洗涤， 671×g离心10分钟,去上清液。重复洗涤3次，然后计数活细胞，使细胞浓度控制在107/ml左右。用离心涂片机离心涂片，晾干，冷丙酮固定，-20℃冰箱保存备用。
主要试剂
CD133单克隆抗体购自R&D公司，CD34单克隆抗体购自Zymed公司，SP kit试剂盒购自天津灏洋公司和北京中杉金桥生物技术有限公司，浓缩型DAB试剂盒购自天津灏洋公司。
方法
免疫细胞化学方法严格按试剂盒说明书进行。
阳性细胞判定标准
阳性细胞的胞膜呈棕色或棕黄色颗粒，观察者记数200个细胞，结果用半定量记分方法判定，即①按阳性细胞占细胞总数的多少分为0-3级，0级：阳性细胞为0； 1级：阳性细胞＜25％； 2级：阳性细胞＜50％； 3级：阳性细胞＞50％； ②按着色细胞染色强弱分为0-3级，0级：弱；2级：中；3级：强。然后以两项积分之和判断阳性程度，"0-2分"为阴性染色，"3-6分"为阳性染色。
统计学处理
两样本率的比较采用χ2检验。结 果
急性白血病患者骨髓细胞CD133表达
43例AL患者CD133表达的阳性率为51.2％。29例AML患者中，16例CD133表达阳性,阳性率为55.2％，其中AMLM1 1例（1／1），AMLM2 5例（5／9），AMLM3 1例（1／8），AMLM4/M5 7例（7／9），MDS转化的AML 2例(2/2)。14例ALL患者中有6例CD133表达阳性，8例CD133表达阴性，CD133表达的阳性率为42.9％。AML组CD133的表达与对照组（2/15，13.3%）间的差别有统计学意义（P<0.05），AML与ALL组之间CD133表达的差别无统计学意义(P>0.05)。对AML各FAB亚型CD133表达率的差异的统计学分析显示，M4/M5亚型的CD133表达率高于M3，差异有统计学意义（P<0.05），其余各亚型之间的差异均无统计学意义（P>0.05）。
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