作者：杨文锋, 李道堂, 李静, 陈绪霞, 王善政

【关键词】 食管肿瘤;,血管内皮生长因子;,树突状细胞;,S100蛋白

　　Theeffectsofvascularendothelialgrowth factor on dendritic cells in esophageal tumor tissue

　　[Abstract] AIM: To investigate the relationship between vascular endothelial growth factor (VEGF) and S100 protein positive dendritic cell (DC) in esophagelal tumor tissue. METHODS: VEGF and S100 protein in 94 patients with esophageal carcinoma were detected by HRP Labelled streptavidin biotin(LSAB) immunohistochemical method. RESULTS: Postive rate of VEGF in esophageal tumor tissues was 74.46%(70/94); and the later the clinical stage and the lower the differentiation level was the more VEGF was(r=0.864, 0.803, respectively; P<0.05); while the later the clinical stage and the lower the differentiation level was, the less number of S100 DCs existed (r=-0.763, -0.908, respectively; P<0.05). Furthermore, there was a reverse correlation between the expression of VEGF and S100 DC (r=-0.817, P<0.05). CONCLUSION: There may be a reverse relationship between the expression of VEGF and S100 DC in esophageal tumor tissue, VEGF could decrease the number of S100 DC and impair the immunological function of the body.
　
　　[Keywords]esophageal carcinoma; vascular endothelial growth factor(VEGF); dendritic cell; S100 protein

　　[摘 要] 目的: 研究食管癌组织中血管内皮生长因子（VEGF）的表达对树突状细胞（DC）的影响。方法: 对94例食管癌组织采用辣根过氧化物酶（HRP）标记的链霉亲和素生物素法(LSAB), 分别检测VEGF、 S100蛋白的表达水平, 并分析VEGF与S100 DC的相关性。结果: 食管癌组织中VEGF的表达率为74.46%（70/94）, VEGF的表达与患者的临床分期及癌组织的分化呈正相关（r=0.864, 0.803, P<0.05）。临床分期越晚, 病癌组织的分化越低, 癌组织内S100 DC的密度越小（r=-0.763, -0.908, P<0.05）。随着癌组织内VEGF表达量的上升, S100 DC的密度降低, 二者呈负相关（r=-0.817, P<0.05）。结论: 食管癌组织中VEGF的表达可降低S100 DC的密度, 从而影响机体的免疫功能。

　　[关键词]食管肿瘤; 血管内皮生长因子; 树突状细胞; S100蛋白

　　肿瘤细胞大量产生的血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor, VEGF）, 不仅有助于肿瘤细胞浸润和转移, 而且还影响树突状细胞（DC）的抗原提呈能力。本研究以S100蛋白作为DC的标志物, 采用辣根过氧化物酶（HRP）标记的链霉亲和素生物素法(LSAB), 检测了94例食管癌组织中VEGF、 S100蛋白的表达水平, 分析VEGF对S100 DC的影响。

　　1 材料和方法

　　1.1 研究对象 选择2002年1月～2004年12月, 在山东省肿瘤医院和山东大学齐鲁医院胸外科住院接受外科手术的94例食管癌患者, 男76例, 女18例, 年龄37～75岁, 中位年龄56岁, 术前均未进行过任何抗肿瘤治疗。根据国际抗癌联盟（UICC）1997年修订的TNM分期标准进行分期, 其中Ⅰ期24例, Ⅱ期20例, Ⅲ～Ⅳ期50例。病理学检查:鳞癌82例, 腺癌12例; 高分化者24例, 中分化者34例, 低分化者36例。

　　1.2 试剂 抗VEGF多克隆抗体（能同时识别VEGF121、 165和189）、 抗S100单克隆抗体（mAb）、 LSAB免疫组化染色法检测试剂盒、 DAB显色试剂盒及羊抗兔lgG, 均为武汉博士德生物工程有限公司产品。

　　1.3 方法 VEGF和S100蛋白的检测均按LSAB试剂盒中的说明进行。将94例食管癌组织经40 g/L的多聚甲醛固定、 石蜡包埋及连续切片（片厚4 μm）后, 加3 mL/L H2O2甲醇溶液于室温温育10 min以灭活内源性过氧化酶的活性。然后滴加10 g/L胰蛋白酶及100 mL/L山羊血清封闭特异性位点。依次滴加抗VEGF多克隆抗体、 抗S100蛋白mAb（37℃温育1 h或4℃冰箱过夜）、 1∶200生物素化的山羊抗兔lgG（37℃温育1 h）及HRP标记的亲合素（37℃温育1 h）。加DAB显色后, 经逐级酒精脱水、 二甲苯透明及中性树胶封片, 观察结果。免疫组化LSAB法检测癌组织内VEGF的表达, 参照Inoue等[1]报道的免疫组化染色法及结果判定标准, 以同一切片中的平滑肌细胞为阳性对照（内对照）。肿瘤细胞染色的强度等于或低于平滑肌细胞者为阴性, 高于平滑肌细胞者为阳性。再根据×400 视野中连续计数200个肿瘤细胞中阳性肿瘤细胞的比例, 将VEGF表达的水平再分为3个级别: 肿瘤细胞与平滑肌细胞的染色强度≤30%者为1 ; ≤70%者为2 ; >70%者为3 。再分别计数5个高倍镜视野中阳性细胞的数目, 取其均值作为阳性细胞分布的密度。S100蛋白的表达以分散地存在于肿瘤细胞之间的细胞质染呈棕黄色的细胞为阳性[2]。并随机在癌周及癌间质区中DC的密集区, 于高倍镜下计数5个视野中的S100 DC, 取其均值作为癌组织中S100 DC的密度。<6个者为1 , 7～15个者为2 , 16个以上者为3 。

　　1.4 统计学分析 等级资料相关分析用秩相关分析法进行, P<0.05表示具有统计学差异。

　　2 结果

　　免疫组化染色显示, VEGF表达阳性者在肿瘤细胞的细胞质中染呈棕黄色或棕褐色。94例肿瘤组织切片中, VEGF表达阳性者70例(阳性率为74.46%), 其中, 1 者18例, 2 者30例, 3 者22例。VEGF的表达与患者的临床分期及癌组织的分化呈正相关（r=0.864, 0.803）, 即临床分期越晚, 癌组织的病理分化越低, 癌组织中VEGF的表达越显著（P<0.05, 表1, 图1）。食管癌组织中DC上S100蛋白的表达: 1 者36例, 2 者 28例, 3 者 30例。临床分期越晚及癌组织的分化程度越低者, 癌组织中S100 DC的数量越少, 即癌组织中S100 DC的密度与患者的临床分期及癌组织的分化程度呈负相关（r=-0.763,-0.908,P<0.05,表1,图2）。食管癌组织中S100 DC的密度与VEGF的表达呈负相关, 即VEGF表达量上升者, S100 DC的密度降低（r=-0.817, P<0.05, 表2）。

　　表1 食管癌组织中 VEGF、 S100 DC的表达与患者临床分期及病理分化的相关性　略

　　图1 食管癌组织内VEGF的表达　略

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